1 甘油液保存法
將已分純的待存菌接種于肉湯中,37℃培養(yǎng)18~24h,然后按5份肉湯溶液、2份甘油-生理鹽水保存液的比例分裝于滅菌的微量離心管或細(xì)胞凍存管中,貼上標(biāo)簽,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作簡便,不需要特殊設(shè)備,效果好,可以保存菌種3年左右,無變異現(xiàn)象,而且此方法還可以保存一些要求較高的特殊菌種,適用范圍廣。所以此方法適合實驗室普通菌種或特殊菌種的較長期的保存[4]。
2 濕牛奶凍存法
將待存菌種于各自生長良好的平板培養(yǎng)基上,經(jīng)分純后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔,再用無菌毛細(xì)滴管吸取菌懸液滴入菌種管球部,每管球部約有一半的菌液,之后火焰封口,貼上標(biāo)簽,保存于-20℃冰箱。此方法操作比較簡便,不需特殊設(shè)備、不需要花費很多時間,而且保存時間大約3年,時間較長,不易變性,也不容易污染。所以此方法適合實驗室菌種較長時間的保存[3]。
3 蒸餾水保存法
取滅菌蒸餾水6~7ml加于已接待存菌斜面培養(yǎng)基的試管內(nèi),用吸管研磨,洗下斜面上的菌苔,充分混勻,將此菌液分裝于滅菌的螺旋小瓶中,或用膠塞密封,貼上標(biāo)簽,置于4℃保存。此法制作簡單,不需要特殊設(shè)備,且不需要經(jīng)常移種,而且可以保存數(shù)年,但要注意保存的時候需要直立放置。所以此方法適合實驗室菌種的長期保存[4]。
4冷凍真空干燥法
將待存菌分純后,用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔,把菌懸液滴入菌種管后,在管口抽取少許棉花塞入管內(nèi)*處,放入冰箱-40℃速凍40min,放入準(zhǔn)備好的混有鹽的冰中,接上真空泵,真空抽干呈粉末狀,火焰封口,貼上標(biāo)簽,保存于-40℃冰箱。此法保存時間長,可達(dá)15年,不易變性,但需要儀器,一般實驗室難以配備,而且過程復(fù)雜,操作難度大,需要較長時間才能完成。所以此方法適合具有條件的實驗室菌種的長期保存[3]。
6小結(jié)
綜上所述,我們在做實驗過程中或者短期保存菌種時,可以選擇斜面低溫保存法、半固體瓊脂法、液體石蠟保存法、高層半固體瓊脂石蠟保存法、紙片法,進(jìn)行保存;如果需要較長時間的保存菌株,可以選擇甘油液保存法、濕牛奶凍存法、蒸餾水保存法、冷凍真空干燥法保存菌株,其中冷凍真空干燥法需要實驗室配備好相應(yīng)的儀器設(shè)備。如果一些菌株營養(yǎng)要求比較高的話,可以選擇甘油液保存法、冷凍真空干燥法保存。當(dāng)然上述菌株保存的方法不是、zui方便的保存法,還需要我們不斷的探索,不斷的研究,找到一種或幾種簡單、方便、時間長的保存方法。
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